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影響色譜柱壽命和其它問(wèn)題的因素有多

點(diǎn)擊次數(shù):1952 發(fā)布時(shí)間:2020-03-27
   通常,一根色譜柱在分析數(shù)千個(gè)樣品之后性能仍然保持良好,但也有的柱僅分析不多的樣品后幾乎就報(bào)廢了。影響柱壽命和其它問(wèn)題的因素多,而有些因素是操作者難控制的,如果被分析的樣品(如分析生物樣品),怎么凈化樣品也是“臟”的,好于色譜柱的影響是非常大的。然而采取下列措施后,在多數(shù)情況下總能夠人為地減少柱上故障,達(dá)到延長(zhǎng)柱壽命的目的。
  1.加流路過(guò)濾器和保護(hù)柱
  流路過(guò)濾器緊靠進(jìn)樣閥后面,位于分析柱前。0.5μm燒結(jié)不銹鋼片夾在死體積小的套子中,擋住來(lái)源于樣品和進(jìn)樣閥墊圈的微粒入柱。因?yàn)槊總€(gè)樣品都過(guò)濾既費(fèi)事又帶來(lái)誤差,樣品量少過(guò)濾更困難,因此流路上裝過(guò)濾器是比較省事的辦法。也可以在流路加上保護(hù)柱,放在流路過(guò)濾器和分析柱之間,或者代替流路過(guò)濾器。保護(hù)柱的使命是收集阻塞柱進(jìn)口的來(lái)自樣品的化學(xué)“垃圾”。這程垃圾終隱藏低柱效能。保護(hù)柱應(yīng)該是小體積,用分析柱的同種填料填裝。保護(hù)柱使用得當(dāng),對(duì)分離無(wú)影響,好像未裝保護(hù)柱一樣。有些廠商的商品將保護(hù)柱都是用短柱、不過(guò)3cm長(zhǎng),內(nèi)徑2~3mm,用較大粒度的填粒(15~20μm)干法填裝,會(huì)使分析柱的效能有所降低。
  2.避免壓沖擊
  一般色譜柱都能經(jīng)得起壓,但經(jīng)不起突然變化的壓沖擊。引起壓突然沖擊,主要是因樣品閥的緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)、泵起動(dòng)快,柱切換操作等。等面已討論過(guò),轉(zhuǎn)動(dòng)六通進(jìn)樣閥時(shí)從泵到柱的液流會(huì)瞬時(shí)切斷。在閥的泵側(cè)壓力升,在閥的柱側(cè)壓力降低(變化過(guò)20%)。閥轉(zhuǎn)到底后壓力突然沖擊一下恢復(fù)正常,手動(dòng)進(jìn)樣閥的變化不大,自動(dòng)進(jìn)樣閥比較慢,可能造成壓力沖擊,可用氦氣代替空氣驅(qū)動(dòng)進(jìn)樣閥。因氨壓縮系數(shù)小。另外泵起動(dòng)不應(yīng)過(guò)快,可分步操作。如用3ml/min流速,從1mL/min到2mL/min,然后再3ml/min,每個(gè)間隔應(yīng)大于20s。
  柱切換技術(shù)的應(yīng)用也,切換過(guò)程中在色譜柱的入口處壓力在零到數(shù)字之間變化,會(huì)快使柱報(bào)廢。
  3.分離條件
  多數(shù)色譜柱有寬的試驗(yàn)條件范圍,但具體應(yīng)用又受到限制,主要是pH值、柱溫和流動(dòng)相的選擇。
  硅膠為基質(zhì)的鍵合相要求pH在2.5~7之間,pH的流動(dòng)相能“溶解”硅膠,使鍵合相流失。結(jié)果非堿性組分峰變寬。如果一定要用或低pH的流動(dòng)相,可加預(yù)柱(飽和柱)。預(yù)柱裝在泵和進(jìn)樣閥之間,用分析柱相同的填料填裝,或者用普通硅膠。硅膠飽和了流動(dòng)相。減少了分析柱填料的損失。預(yù)柱不要求柱效,用價(jià)格低的一般硅膠疏松地填裝,按期檢查硅膠的溶解情況。用預(yù)柱也有不利的影響。即流動(dòng)相難以平衡,保留時(shí)間不穩(wěn)定或穩(wěn)定慢。使用了預(yù)柱一定要加流路過(guò)濾器,以防止硅膠微粒引起的麻煩。
  以硅膠為基質(zhì)的柱和陰離子交換柱過(guò)60℃后,會(huì)增加對(duì)流動(dòng)相中化學(xué)物質(zhì)的吸附。在溫下用小顆粒柱引起柱床塌陷,降低柱效,改變峰形。在4℃以上使用3μm柱,70℃以上使用5μm柱,會(huì)使N值降低50%。
  有些流動(dòng)相中的溶劑不能用于某些柱,如小顆粒的聚苯乙烯填料不能用于非水的排阻色譜。另一方面,有些柱與某些溶劑(如四氫呋喃)一旦達(dá)到平衡,不要隨意改用其它溶劑。有關(guān)這些填料,可以參見(jiàn)有關(guān)資料。
  水溶性流動(dòng)相會(huì)引起微生物生長(zhǎng)而造成阻塞柱。色譜柱應(yīng)存放在純有機(jī)溶劑或加了50%有機(jī)溶劑的水中。凝膠柱可存放在水溶性緩沖液中,同時(shí)加0.01%疊氮鈉以防止微生物的生長(zhǎng)。

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